2.2食品样品中测量OPEs的食品酸酯术净化技术
在食品基质中痕量分析有机污染物残留时,常伴随脂质以及其他有机物的中有阻燃干扰,为消除该干扰通常采用强酸或强碱对样品进行处理,机磷剂检进展但OPEs在强酸碱条件下易降解,测技因此仪器分析之前采用合适的研究净化方法成为必须。对食品基质提取液中OPEs净化时,食品酸酯术常用Florisil、中有阻燃Al2O3、机磷剂检进展C18为填料的测技SPE柱,其中Florisil易从非极性基质中吸附极性化合物,研究Al2O3具相对温和的食品酸酯术去脂能力,而C18对非极性和中等极性的中有阻燃组分均具有吸附作用。Santín等采用LC-MS/MS分析测定鱼肉中16种OPEs,机磷剂检进展考察了5gFlorisil、测技中性Al2O3、研究碱性Al2O3分别与2gC18混合制备SPE柱的净化效果,结果表明,5g碱性Al2O3和2gC18回收率为48%~113%,RSD<10%,而中性Al2O3和C18、Florisil和C18,回收率分别为23%~120%和1.6%~101%。Zhang等对常用的固体和液体食品分别进行MAE和UAE提取,均通过4gFlorisil、4g中性硅胶和2g无水硫酸钠为填料的SPE柱净化,选用甲醇和正己烷分别对所制备的SPE进行淋洗,上样后用丙酮-乙酸乙酯(3∶7,v/v)洗脱,提取液经氮吹丙酮复溶后进行GC-MS/MS检测,分析测定6种OPEs,获得满意回收率。
也有报道采用SPE技术结合d-SPE或GPC净化技术,最大程度去除脂质及其他物质的干扰。Liu等选用传统的索氏技术提取后,将提取液分别经过OasisHLBSPE柱以及Z-Sep和C18混合分散固相萃取吸附剂进行两步净化,采用GC-MS对鱼肉中12种OPEs进行测定,检出限为0.004~0.059ng/g,回收率为56%~108%。Xu等将多种肉类食品提取液分别通过FlorisilSPE柱、C18和Z-Sep混合分散固相萃取吸附剂、丙氨基SPE柱多步净化,有效去除脂质,降低了基质效应。采用GC-MS测定肉类样品中OPEs,定量限为1.400~3.700ng/g,平均RSD值为7%。Ma等利用GC-MS方法测定家禽类食品中14种OPEs,通过MAE提取,将SPE和GPC净化技术相结合,有效去除脂质并降低了共萃取物的干扰。方法检出限为0.006~0.021ng/g,回收率为70%~111%,重现性良好。
3分离与检测技术
选择合适的分离和检测方法,可以降低相互干扰和基质效应,进而提高检测灵敏度和选择性,实现食品中痕量OPEs的测定。以GC、LC为基础的色谱分离、质谱及选择性检测器在食品中OPEs检测中均有应用,如气相色谱-电子轰击源/化学电离源/负电子捕获电离源-质谱(GC-EI/CI/ENCI-MS)、气相色谱-串联质谱、气相色谱-高分辨质谱(GC-HRMS)、液相色谱-电喷雾电离源/大气压化学电离源-串联质谱(LC-ESI/APCI-MS/MS)、超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)、气相色谱-氮磷检测器以及气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)等。相关信息见表2,其中气相色谱-质谱应用更为普遍,其方法检出限和定量限相对于液相色谱-质谱低1~2个数量级。
3.1气相色谱法
由于大部分OPEs具有一定挥发性,因此GC最常用,鉴于化合物具有较宽的极性和沸点范围,(5%苯基)-甲基聚硅氧烷(DB-5MS)作为通用型色谱柱应用最广,柱长从15~30m不等,常用规格为30m×0.25mm×0.25μm。Rodriguez等比较了相同规格(30m×0.25mm×0.25μm)的DB-5以及14%氰基-苯基-甲基-聚硅氧烷(SPB-1701)色谱柱对OPEs分离的影响。结果表明,SPB-1701色谱柱对互为同分异构体的TCPP和TCIPP分离效果较差,DB-5色谱柱分离TBOEP和TPHP受温度影响大导致选择性较差。通过优化实验条件,确定起始温度在50℃保持1min,以15℃/min升至260℃保持10min,进样量1μL,不分流进样,进样口和检测器温度分别为270℃和320℃,使用GC-NPD对水样中OPEs分析测定。方法检出限为4μg/mL,线性相关系数为0.9970,RSD为2%~3%。
使用GC-MS测定OPEs时,常用EI源、CI源、ECNI源。其中EI源具有较高的电离效率,通过丰富的碎片离子以及较完善的谱图库,利于结构鉴定。Gustavsson等比较了GC-EI-MS、GC-CI-MS、GC-EI-MS/MS3种检测方法,GC-EI-MS对OPEs定性选择能力较强。Ma和Hites等比较了EI源、ECNI源、正化学电离(PCI)源3种电离源对13种OPEs裂解规律、定量及定性能力。结果表明,根据化合物结构,EI源主要产生H4PO+4、[M-Cl]+、[M-CH2Cl]+或[M]+离子碎片;ECNI源通常生成碎片[M-R]-;PCI源主要产生质子化的分子离子碎片[M+H]+。当选用EI源作电离源时应注意,对于大多烷基类和卤化类的OPEs均会生成m/z99的质子化磷酸基团H4PO+4,该基团没有保留任何OPEs断裂丢失基团的信息,选该基团作为定量离子时同位素稀释质谱法将不再适用。因此在定量分析时,应尽量选取m/z99以外的其他特征离子,这也使得分析测定OPEs具有一定难度。
在分析基质复杂的食品时,GC-MS/MS相对于GC-MS表现出更好的选择性、准确度以及更低的定量限。Poma等利用QuEChERS结合SPE前处理方法和GC-EI-MS/MS检测技术,以TCEP-d12、TDCIPP-d15、TPHP-d15作为内标,测定鸡蛋、鱼肉、谷物、土豆等多种食品中14种OPEs,方法的定量限达到0.001~61.970ng/g,并表现出较好的回收率。Liu等等使用索氏提取,OasisHLBSPE柱和Z-Sep-C18(质量比1∶1)多步净化,以TnPP-d21、TnBP-d27、TCPP-d18、TPHP-d15为内标,GC-EI-MS/MS同时测定鱼肉中12种OPEs,检出限为0.005~0.810ng/g。
3.2液相色谱法
LC-MS/MS测定沸点高、不易挥发、相对分子质量大的OPEs具有较高的灵敏度,但却常伴随基质效应以及分离困难等不足。LC分离OPEs通常选用C18或C8为固定相色谱柱(UPLCBEHC18、LunaC8、WatersXteraC18等),甲酸水溶液、甲醇、乙腈或其混合溶液作为梯度洗脱流动相,大多选用正离子模式、电喷雾电离(ESI+)源,并结合多反应监测(MRM)模式进行信息采集。
Ding等采用QuEChERS前处理方法,以WatersBEHC18柱(100mm×2.1mm,1.7μm)作分析柱,0.1%甲酸水溶液和乙腈溶液作流动相,UPLC-MS/MS(ESI+)方法测定了蔬菜、牛奶、谷物等食品中10种OPEs,方法检出限为0.020~0.240ng/g,定量限为0.050~0.420ng/g,回收率为73%~106%;OPEs在食品中总含量为1.100~9.600ng/g,谷物中OPEs的残留量相对较高,其中TEHP含量最高。Tokumura等比较了GC-EI-MS、GC-NCI-MS、LC-ESI-MS/MS、LC-APCI-MS/MS4种检测技术分析14种OPEs纯品,研究发现LC-ESI-MS/MS和LC-APCI-MS/MS(0.810~970pg)的定量限比GC-EI-MS和GC-NCI-MS(2.300~3900pg)低1~2个数量级。Chen等利用LC-ESI-MS/MS测定了鲱鸥蛋中12种OPEs,优化条件下基质效应为86%~99%,定量限为0.060~0.200ng/g。Han等分析肉类和鱼类样品,GC-MS/MS和UPLC-MS/MS分别测定8种和14种OPEs化合物。除TiBP和TnPP外,GC-MS/MS定量限更低;两种方法测定大多OPEs的基质效应均在±20%范围内,但UPLC-MS/MS测定鲑鱼中OPEs时,基质抑制效应明显,为40%~79%。
声明:本文所用图片、文字来源《色谱》2020年12月,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系
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